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GST pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

GSTPulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理Pulldown技術(shù)是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標(biāo)簽（如：GST標(biāo)簽、His標(biāo)簽）進(jìn)行融合表達(dá)，而帶標(biāo)簽的誘餌蛋白能被特異結(jié)合該標(biāo)簽的固相親和配基捕獲，形成"次級(jí)親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Westernblot驗(yàn)證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）融合標(biāo)簽從細(xì)菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白...

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常用的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法【大盤點(diǎn)】

細(xì)胞凋亡人體內(nèi)的細(xì)胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關(guān)細(xì)胞死亡過(guò)程的研究，已成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。已知的細(xì)胞死亡方式起碼有兩種，即細(xì)胞壞死與細(xì)胞凋亡(apoptosis)。細(xì)胞壞死是早已被認(rèn)識(shí)到的一種細(xì)胞死亡方式，而細(xì)胞凋亡則是逐漸被認(rèn)識(shí)的一種細(xì)胞死亡方式。此圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細(xì)胞凋亡不僅...

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【表觀遺傳】中樞性性早熟研究

中樞性性早熟（CPP）是兒科內(nèi)分泌的常見疾病，發(fā)病率較高，且逐年增加趨勢(shì)明顯。CPP可以導(dǎo)致患者或者家長(zhǎng)出現(xiàn)社會(huì)、心理問(wèn)題，而且還可能嚴(yán)重?fù)p害兒童的終身高。因此，CPP是兒科內(nèi)分泌醫(yī)生密切關(guān)注的疾病之一。CPP發(fā)病原因目前尚不明確，可能是由于某種因素促發(fā)了下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）神經(jīng)元，使其提前活化，通過(guò)分泌大量的GnRH，進(jìn)而激活下丘腦-垂體-性腺軸。5-羥色胺（5-HT）最初在血清中發(fā)現(xiàn)，又名血清素，是一種吲哚衍生物，它廣泛存在于哺乳動(dòng)物中。5-HT由色氨酸代...

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細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)及其定制化解決方案常用的細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，主要包含：細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞保種、原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)、細(xì)胞增殖檢測(cè)（MTT法/CCK8法）、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲、流式細(xì)胞分選、慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選、電生理檢測(cè)、定制化細(xì)胞模型等。原代細(xì)胞分離我司可提供細(xì)胞培養(yǎng)和原代細(xì)胞分離的服務(wù)。例如：原代schwann細(xì)胞、原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞、原代成骨細(xì)胞、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、海綿體平滑肌細(xì)胞等。細(xì)胞培養(yǎng)與傳代細(xì)胞凍存/保種細(xì)胞復(fù)蘇細(xì)胞換液培養(yǎng)細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)...

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細(xì)胞低氧培養(yǎng)模型簡(jiǎn)介

人的生存離不開氧氣。如果你感覺(jué)很長(zhǎng)一段時(shí)間里整天無(wú)精打采、昏昏欲睡，在排除睡眠不足的因素外，那么你有可能是血液中缺氧了。血液除了能在身體內(nèi)流動(dòng)，攜帶能量、廢物等，最主要的功能就是攜帶氧氣，這是它的基本功能之一。如果血液缺氧，嚴(yán)重時(shí)就會(huì)導(dǎo)致器官病變，最常見的就是心梗、腦梗等。近年來(lái)，低氧(Hypoxic)于生物機(jī)體及細(xì)胞的生理作用及其分子機(jī)制研究越來(lái)越受到醫(yī)學(xué)科研學(xué)者的關(guān)注。低氧培養(yǎng)的適用研究領(lǐng)域近30年來(lái)與“低氧誘導(dǎo)”相關(guān)的文章統(tǒng)計(jì)(此項(xiàng)數(shù)據(jù)來(lái)源于Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù))細(xì)胞是生...

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細(xì)胞焦亡研究中的檢測(cè)指標(biāo)有哪些？

細(xì)胞焦亡是什么？細(xì)胞凋亡（Apoptosis）是經(jīng)典的細(xì)胞死亡方式，但隨著研究的不斷深入，很多細(xì)胞死亡現(xiàn)象并不能用細(xì)胞凋亡來(lái)解釋，隨著研究的深入，科學(xué)家又陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了一些新的細(xì)胞死亡新機(jī)制。細(xì)胞焦亡（Pyroptosis）便是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)并證實(shí)的一種炎癥程序性細(xì)胞死亡，其特征為依賴于炎性半胱天冬酶（主要是caspase-1，4，5，11），并伴有大量促炎癥因子的釋放。細(xì)胞焦亡可由各種病理刺激引發(fā)，如中風(fēng)、心臟病發(fā)作、癌癥、感染等。按照激活機(jī)制，細(xì)胞焦亡可分為Caspase-1依賴...

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如何選擇合適的內(nèi)參抗體？

如何選擇合適的內(nèi)參抗體？Tips：在選擇內(nèi)參抗體時(shí)，我們需要遵循幾個(gè)原則：1.種屬來(lái)源哺乳動(dòng)物的樣本需要選擇哺乳動(dòng)物中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白作為內(nèi)參，同樣的，植物樣本需要選擇植物中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白作為內(nèi)參。2.細(xì)胞定位靶標(biāo)蛋白的細(xì)胞定位不同，適合的內(nèi)參也不同。如全細(xì)胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等，膜蛋白一般選擇NaKATPase，核蛋白則選擇LaminB1、HistoneH3等。3.分子量?jī)?nèi)參蛋白的分子量需要與目標(biāo)蛋白的分子量有所區(qū)別，否則兩者條帶無(wú)法分...

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TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測(cè)假陽(yáng)性率高怎么破？

TUNEL法基于對(duì)細(xì)胞DNA損傷的檢測(cè)，通?？捎糜跈z測(cè)組織切片樣本和細(xì)胞樣本，是晚期細(xì)胞凋亡檢測(cè)中常用的方法。那么對(duì)于檢測(cè)過(guò)程中常見的假陽(yáng)性率高的現(xiàn)象是如何產(chǎn)生的呢？1.固定操作不當(dāng)固定液選擇不恰當(dāng)，固定液濃度過(guò)高，固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，組織切片過(guò)厚都會(huì)影響固定效果。一般建議選擇含4%多聚甲醛的PBS溶液來(lái)固定細(xì)胞或組織切片，時(shí)間在30min左右。2.基因轉(zhuǎn)錄水平高基因轉(zhuǎn)錄活性高的非凋亡細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性，例如睪丸組織。3.激發(fā)光下長(zhǎng)時(shí)間照射在強(qiáng)激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間照射下，高濃度的PI會(huì)吸收能...

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